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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、骨組織中的 OT 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于骨形成、鈣沉積、骨轉換速率及骨質疏松評價研究等領域。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 OT 抗體。

結合：加入標準品或樣本，OT 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 OT 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變為黃色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細胞上清：離心除雜質，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復孔檢測。

操作步驟：

1. 試劑準備

將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。

標準品用標準品稀釋液復溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。

2. 實驗流程

加樣：設置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。

洗滌：棄凈孔內液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復洗滌 5 次。

加酶結合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。

洗滌：重復上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。

顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉黃。

讀數：15 min 內，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。

3. 關鍵質控要點

全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發、交叉污染。

洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。

TMB 顯色液避光儲存，現用現加，嚴禁接觸氧化劑。

加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。

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