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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞外基質(zhì)中的 I 型膠原（COL1）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于骨代謝、纖維化疾病、組織修復(fù)、骨質(zhì)疏松及腫瘤侵襲研究等領(lǐng)域。

產(chǎn)品名稱：大鼠I型膠原(COL1)elisa試劑盒

英文名稱：COL1 ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

產(chǎn)品貨號(hào)：CS-6187E

檢測原理：

大鼠I型膠原(COL1) elisa試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 COL1 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，COL1 被固相抗體捕獲。

檢測：加入生物su化的抗大鼠 COL1 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

實(shí)驗(yàn)步驟?：

1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。

2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔，精準(zhǔn)加樣后封板。

3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng)，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。

4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復(fù)洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。

6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體，保證背景干凈。

7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。

8.加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。

9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟?：

?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?：

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），按說明書稀釋洗滌緩沖液（通常1:19）。

?標(biāo)準(zhǔn)品?：用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。

?樣本?：血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高，可按說明書（如1:10）稀釋。

?2、加樣與孵育?：

每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。

輕輕振蕩混勻，避免觸碰孔壁。

37℃孵育90分鐘（部分試劑盒可能為120分鐘，需以說明書為準(zhǔn)）。

?3、洗滌?：

棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液加滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)5-6次。

4?、加檢測抗體與孵育?：

每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。

37℃孵育60分鐘。

5?、再次洗滌?：

同步驟3，洗去未結(jié)合抗體。

6?、顯色?：

每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。

37℃避光孵育10-15分鐘。

?7、終止與測定?：

每孔加入50μL終止液，立即混勻（顏色由藍(lán)變黃）。

在加終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔吸光度（OD值）。