本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠細胞核、組織勻漿、細胞裂解液中的 ARNTL 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于生物鐘調(diào)控、晝夜節(jié)律、代謝節(jié)律及轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠芳烴受體核轉(zhuǎn)位因子樣蛋白1elisa試劑盒 | 英文名稱 | ARNTL ELISA Kit |
貨號 | CS-5943E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 ARNTL 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，ARNTL 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 ARNTL 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
血清：無熱源無菌采血管采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。
2. 通用注意事項
1) 樣本嚴禁添加疊氮鈉（NaN?），會抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。
2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。
3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。
4) 細胞上清、低豐度指標樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實驗誤差。
5) 檢測濃度超標時，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質(zhì)體系。
操作步驟：
1.試劑平衡試劑盒室溫平衡 30 min；濃縮洗滌液按說明書稀釋混勻。
2.設(shè)孔加樣設(shè)空白、標準品、待測樣品孔，精準加樣，封板。
3.溫育結(jié)合37℃孵育 30–60 min，棄液拍干。
4.洗板加滿洗滌液浸泡，甩干拍干，重復(fù)3–5 次。
5.加酶結(jié)合物除空白孔外每孔加 HRP 標記液，封板 37℃孵育。
6.再次洗板充分洗凈未結(jié)合游離酶，控干殘留液體。
7.顯色避光加顯色液 A/B，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)加終止液變色穩(wěn)定后，立刻酶標儀讀 OD 值。
9.結(jié)果計算標準曲線擬合，換算樣本濃度。
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