本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的肺炎病毒特異性抗體水平。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于肺部病毒感染監測、免疫應答評價、抗病物效果研究。
產品名稱 | 大鼠肺炎病毒抗體(PV-Ab)elisa試劑盒 | 英文名稱 | PV-Ab ELISA Kit |
貨號 | CS-5936E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理:

固相化:微孔板預先包被肺炎病毒特異性抗原。
結合:加入標準品或樣本,特異性抗體與抗原結合。
檢測:加入化抗大鼠二抗及 HRP 標記親和素,形成免疫復合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍色變為黃色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
血清:無熱源無菌采血管采集,杜絕溶血、脂血污染;1000×g 離心 10 min 分離上清,-20℃分裝保存,嚴禁反復凍融。血漿:選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻,離心去除血細胞取上清備用(部分試劑盒慎用肝素)。細胞上清:收集后 1000×g 離心 10 min 去除細胞碎片與雜質,-70~-80℃低溫保存。組織勻漿:預冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿,高速離心取澄清上清,-20℃避光分裝貯存。
2. 通用注意事項
1) 樣本嚴禁添加疊氮鈉(NaN?),會抑制 HRP 酶活性,導致顯色失效。
2) 所有樣本避免室溫久置,全程低溫操作,防止蛋白降解。
3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄,干擾抗體抗原結合。
4) 細胞上清、低豐度指標樣本務必設置復孔,校正實驗誤差。
5) 檢測濃度超標時,僅用試劑盒配套稀釋液稀釋,匹配基質體系。
操作步驟:

1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標準溶液,備用。
2. 實驗流程
加樣:設置空白孔、標準孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復洗滌 5 次。
加酶結合物:每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍轉黃。
讀數:15 min 內,酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值,擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關鍵質控要點
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存,現用現加,嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。
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