本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠下丘腦、垂體、腦脊液、血清中的 CRF 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于應(yīng)激軸激活、焦慮抑郁、腎上腺功能及神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)研究。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子elisa試劑盒 | 英文名稱 | CRF ELISA Kit |
貨號 | CS-6003E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 CRF 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，CRF 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 CRF 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本處理
1) 血清：無菌無熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。
2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。
3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。
4) 組織勻漿：預(yù)冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。
2. 通用注意
嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設(shè)置復(fù)孔。
操作步驟：
1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本，空白孔加等量；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復(fù)洗滌5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)，降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復(fù)上述洗板操作 5 次，嚴格拍干孔內(nèi)殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準孵育 10~15min，此時液體逐步顯現(xiàn)藍色，顯色深淺與待測物含量正相關(guān)。
6.反應(yīng)終止
嚴格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍色即刻轉(zhuǎn)為黃色，終止酶促顯色反應(yīng)。
7.上機讀數(shù)檢測
加終止液后15min 內(nèi)，用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線，擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
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