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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠基底膜、血清、組織勻漿中的 LN 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于基底膜完整性、細胞黏附遷移、組織纖維化、腎小球損傷及腫瘤侵襲轉移研究。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 LN 抗體。

結合：加入標準品或樣本，LN 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 LN 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變為黃色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本處理

1) 血清：無菌無熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復凍融。

2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。

3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 組織勻漿：預冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。

2. 通用注意

嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設置復孔。

操作步驟：

1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。

2.設置空白孔、標準品孔、待測樣品孔，精準加樣后封板。

3.37℃恒溫孵育結合反應，結束后棄孔內液體拍干。

4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復洗板 3–5 次，去除未結合雜質。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結合物，再次 37℃溫育。

6.重復洗板流程洗凈游離酶標抗體，保證背景干凈。

7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍色清晰顯現。

8.加入終止液終止反應，顏色由藍轉黃，即刻用酶標儀讀取 OD 值。

9.根據標準曲線擬合計算，得出樣本目標物質濃度。

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