本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 C3a 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于補體激活、過敏毒素效應、炎癥趨化、肥大細胞活化及免疫炎癥性疾病研究。
產品名稱 | 大鼠補體片斷3a(C3a)elisa試劑盒 | 英文名稱 | C3a ELISA Kit |
貨號 | CS-6039E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預先包被抗大鼠 C3a 抗體。
結合：加入標準品或樣本，C3a 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 C3a 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變為黃色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本處理
1) 血清：無菌無熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復凍融。
2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。
3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。
4) 組織勻漿：預冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。
2. 通用注意
嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設置復孔。
操作步驟：
1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。
2. 實驗流程
加樣：設置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復洗滌 5 次。
加酶結合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉黃。
讀數：15 min 內，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關鍵質控要點
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現用現加，嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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