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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、腎臟組織中的 CFH 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于補體旁路途徑調控、免疫復合物清除、溶血尿毒綜合征、腎臟免疫損傷及自身免疫病研究。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 CFH 抗體。

結合：加入標準品或樣本，CFH 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 CFH 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變為黃色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

血清：無熱源無菌采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴禁反復凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細胞碎片與雜質，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。

2. 通用注意事項

1) 樣本嚴禁添加疊氮鈉（NaN?），會抑制 HRP 酶活性，導致顯色失效。

2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結合。

4) 細胞上清、低豐度指標樣本務必設置復孔，校正實驗誤差。

5) 檢測濃度超標時，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質體系。

操作步驟：

關鍵實操技巧

1.加樣技巧

一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統一。

2.溫育控溫

須37℃恒溫、封板膜嚴實防蒸發冷凝；時間嚴格卡死，過長背景高、過短信號低。

3.洗板核心

每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。

4.樣本規范

杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復凍融；嚴禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標只用試劑盒配套稀釋液。

5.顯色與讀數

全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數，放置越久數值漂移越大。

6.基礎質控

樣本、標準均做復孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復開蓋失效。

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