本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的 LAP 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于蛋白降解、肽鏈加工、肝腎損傷及細胞外蛋白水解研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠亮氨酰氨基肽酶(LAP)elisa試劑盒 | 英文名稱 | LAP ELISA Kit |
貨號 | CS-5675E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 LAP 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，LAP 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 LAP 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本處理
1) 血清：無菌無熱源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。
2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。
3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。
4) 組織勻漿：預(yù)冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。
2. 通用注意
嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設(shè)置復(fù)孔。
操作步驟：
1.試劑準備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。
標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。
2.實驗流程
加樣：設(shè)置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。
加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。
洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。
顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍色。
終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉(zhuǎn)為黃色。
檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
3.關(guān)鍵提示
實驗全程嚴格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發(fā)。
洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。
顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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