本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿中的 ACA-IgG 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于抗磷脂綜合征、血栓傾向、自身免疫性流產(chǎn)及磷脂代謝異常研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)elisa試劑盒 | 英文名稱 | ACA-IgG ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5714E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理:
固相化:微孔板預(yù)先包被心磷脂抗原。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,ACA-IgG 與抗原結(jié)合。
檢測(cè):加入化的抗大鼠 IgG 二抗及 HRP 標(biāo)記親和素,形成復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:
1. 樣本類型與處理
血清:無(wú)熱源無(wú)菌采血管采集,杜絕溶血、脂血污染;1000×g 離心 10 min 分離上清,-20℃分裝保存,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿:選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻,離心去除血細(xì)胞取上清備用(部分試劑盒慎用肝素)。細(xì)胞上清:收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì),-70~-80℃低溫保存。組織勻漿:預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿,高速離心取澄清上清,-20℃避光分裝貯存。
2. 通用注意事項(xiàng)
1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉(NaN?),會(huì)抑制 HRP 酶活性,導(dǎo)致顯色失效。
2) 所有樣本避免室溫久置,全程低溫操作,防止蛋白降解。
3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄,干擾抗體抗原結(jié)合。
4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔,校正實(shí)驗(yàn)誤差。
5) 檢測(cè)濃度超標(biāo)時(shí),僅用試劑盒配套稀釋液稀釋,匹配基質(zhì)體系。
操作步驟:
關(guān)鍵實(shí)操技巧
1.加樣技巧
一次性換新槍頭,垂直貼孔壁低位加液;避免氣泡、飛濺交叉污染;整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴(yán)實(shí)防蒸發(fā)冷凝;時(shí)間嚴(yán)格卡死,過(guò)長(zhǎng)背景高、過(guò)短信號(hào)低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出,浸泡≥30 s;拍干用無(wú)塵吸水紙,杜絕殘留;洗板不足直接高背景、假陽(yáng)性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本;禁止反復(fù)凍融;嚴(yán)禁含 NaN?抑制 HRP 活性;濃度超標(biāo)只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光;整板顯色時(shí)長(zhǎng)一致;加終止液立刻讀數(shù),放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎(chǔ)質(zhì)控
樣本、標(biāo)準(zhǔn)均做復(fù)孔;室溫潔凈避光操作;試劑分裝取用,減少反復(fù)開(kāi)蓋失效。
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