產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠細(xì)胞裂解液、組織勻漿中的 RhoE 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞骨架調(diào)控、遷移侵襲、細(xì)胞周期及腫瘤轉(zhuǎn)移研究。
產(chǎn)品名稱：大鼠RhoEelisa試劑盒
英文名稱:RhoE ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
貨號(hào):CS-6162E
檢測(cè)原理：
大鼠 Rho Eelisa試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測(cè)。
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 RhoE 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，RhoE 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗大鼠 RhoE 抗體和 HRP 標(biāo)記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
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實(shí)驗(yàn)步驟?：
1.加樣孵育
每孔精準(zhǔn)加入 100μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本，空白孔加等量樣本稀釋液；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復(fù)洗滌5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)，降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標(biāo)記特異性檢測(cè)抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復(fù)上述洗板操作 5 次，嚴(yán)格拍干孔內(nèi)殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽(yáng)性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準(zhǔn)孵育 10~15min，此時(shí)液體逐步顯現(xiàn)藍(lán)色，顯色深淺與待測(cè)物含量正相關(guān)。
6.反應(yīng)終止
嚴(yán)格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍(lán)色即刻轉(zhuǎn)為黃色，終止酶促顯色反應(yīng)。
7.上機(jī)讀數(shù)檢測(cè)
加終止液后15min 內(nèi)，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔 450nm 波長(zhǎng)吸光度（OD 值）；以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合方程計(jì)算待測(cè)樣本目標(biāo)蛋白濃度。
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